PG电子细胞免疫荧光实验步骤指南

来源:寇锦伯日期:2025-03-13

操作步骤如下：PG电子 提供的细胞培养和染色技术操作流程简洁明了。

PG电子细胞免疫荧光实验步骤指南

1. PBS 洗涤细胞

首先，将已爬好细胞的玻片在培养板中用 PBS 清洗三次，每次持续 3 分钟，以去除培养基中的残留物质。

随后，用 4% 的多聚甲醛对爬片固定 15 分钟，再次用 PBS 洗涤玻片三次，每次 3 分钟，以确保细胞结构的完整性。

采用 0.5% Triton X-100（PBS 配制）于室温下透化细胞 20 分钟，需注意的是，此步骤可根据细胞膜上表达的抗原情况决定是否进行。

用 PBS 洗涤玻片三次，每次 3 分钟，吸干后在玻片上滴加正常山羊血清（如果二抗来源为山羊），在室温下封闭 30 分钟，减少非特异性结合。

吸去封闭液后，无需洗涤，直接在每张玻片上添加适量的稀释好的一抗，放入湿盒中于 4℃ 孵育过夜。

使用 PBST 洗涤爬片三次，每次 3 分钟，吸干多余液体后，滴加稀释好的荧光二抗，在湿盒中于 20-37℃ 孵育 1 小时，最后再用 PBST 洗涤切片三次。切记，从此步骤开始，后续操作都应在较暗处进行，以保护荧光信号。

吸去液体后，再次在玻片上滴加正常山羊血清进行室温下的封闭，保持 30 分钟。

吸干封闭液后，直接滴加稀释好的第二种一抗，确保其物种来源与第一种不同（如小鼠与兔），并在 4°C 的湿盒中避光孵育过夜。

用 PBST 洗涤爬片三次，吸干多余液体后，加入稀释好的第二种荧光二抗，在湿盒中于适宜温度下孵育 1 小时，最后再用 PBST 洗涤切片三次。注意，若第一种抗体使用红色荧光，第二种则应选用其他颜色的荧光。

最后，滴加 DAPI 进行核染色，避光孵育 5 分钟，随后用 PBST 清洗 4 次，去除多余的 DAPI。

用吸水纸吸干爬片上的液体，然后使用含抗荧光淬灭剂的封片液进行封片，最后在荧光显微镜下观察并采集图像。

PG电子 提供多种规格的细胞爬片，包括：

注：PG电子 可以根据用户需求定制任何规格的细胞爬片。