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NEWS显色示踪荧光定量操作解析 - PG电子生物医疗宝典
来源:易雁之 日期:2025-03-15
提示:在混合过程中尽量避免产生气泡,以免影响酶的活性或实验数据的准确性。
常见的荧光定量仪器为96孔反应板,通常分为12列×8行。
以基因1的检测为例,配制如下:
- HieffUNICON®ColorGPSqPCRMasterMix: 10μL
- 正向引物(10μM): 0.4μL
- 反向引物(10μM): 0.4μL
- RNase-free H2O: 7.2μL
- cDNA模板: 2μL(针对基因1检测)
组合成22孔总量为220μL的检测溶液:
- HieffUNICON®ColorGPSqPCRMasterMix: 220μL
- 正向引物(10μM): 8.8μL
- 反向引物(10μM): 8.8μL
- RNase-free H2O: 158.4μL
完成上述配置后,严密封管,并轻弹管壁以确保充分混合,随后进行短暂离心,防止气泡生成。将管置于冰块或冰板上保持低温。
步骤如下:
确保无气泡后,将样品置于洁净的96孔PCR管架中。注意观察每一次吸取操作是否出现气泡,以免导致实验数据偏差。
在进行PCR之前,仔细检查每个管子,确保管盖及管身没有标记笔的染料,管内无气泡且管壁无液体。若采用常规程序,则设置如下:
以ABIQ5为例,确保在退火/延伸和熔解曲线的升温阶段开启数据信号收集开关。若使用快速程序,确认仪器能快速升降温,并运行快速程序设置。
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