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NEWSPG电子 DNA提取试剂盒操作指南
来源:通元功 日期:2025-03-16整个操作过程大约需要1小时,包括匀浆、细胞裂解、去除蛋白质以及DNA纯化等步骤,具体说明如下:
提取基因组DNA时,使用不同的实验材料需采用相应的匀浆步骤。以下是针对不同材料的详细说明:
在使用研钵进行匀浆时,首先取1~100mg的动物或人组织,放入预冷的研钵中,并快速用力研磨成匀浆。特别注意:以下组织需先用液氮粉碎成粉末状:
A. 富含DNA酶的胰脏、脾脏、胸腺、淋巴等组织。
B. 富含胶原蛋白的皮肤、肌腱等组织。
C. 其他富含角质蛋白或坚硬的组织(如骨骼等)。
接下来,加入650μl的SolutionA和0.9μl的RNaseA1,轻轻研磨30秒钟。值得注意的是,使用上述材料时,应在加入SolutionA及RNaseA1后将研钵置于65℃水浴中研磨1分钟。
随后,将650μl研磨好的组织匀浆液转移至CollectionTube中。如果匀浆体积不足650μl,请用SolutionA补充至650μl,并在65℃下保温5分钟。
首先按表格称取适量的新鲜植物材料(如选用冷冻干燥植物材料,则用量减半),剪成小块并放入研钵中,加入液氮,待材料完全冷却后快速研磨至粉末。研磨时应间断加入液氮以防止材料融化。以下是植物材料的推荐使用量:
- 植物花、叶片:10~100mg
- 植物茎:60~240mg
- 植物根:80~240mg
- 植物种子:80~240mg
请注意,根、种子等样品的基因组DNA含量较低,需使用超过推荐量,建议将步骤分管进行实验,最终在过滤时将各管液体合并。若从培养的植物细胞提取DNA,需收集2×103~1×107颗细胞,并加入150μl水来悬浮细胞,接着加入液氮并快速研磨至粉末状。
最后,研磨完成后需将研钵移至65℃水浴,待样品刚开始融化时,加入700μl的SolutionA和12μl的RNaseA1,用力研磨30秒,将650μl匀浆液收集至CollectionTube中。如不够650μl,补充SolutionA至650μl,并在65℃保温15分钟。
取10~250μl的全血(含抗凝剂),加入到CollectionTube中,接着加入500μl的SolutionA和1μl的RNaseA1,最后激烈振荡15秒并在冰浴中静置5分钟。
对于悬浮培养的动物细胞,使用CollectionTube收集1×105~1.5×107细胞悬液,离心5分钟后弃去上清液。然后加入150μl灭菌蒸馏水或PBS来悬浮细胞,再加入500μl的SolutionA和0.8μl的RNaseA1,激烈振荡15秒后在室温下静置1分钟。
本流程中的每个步骤均可通过PG电子的高品质试剂来实现最佳效果,确保您的实验结果可靠且高效同时提升实验室工作效率。
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